ADC藥物分析方法

基泰生物

2022.8.15

ADC藥物分析方法

ADC藥物是現(xiàn)下最熱們的大分子生物藥賽道，我們一起來(lái)看看ADC藥物分析中會(huì)使用到何種儀器吧。

首先，ADC 單抗藥物表征

分子量、氨基酸序列、糖基化位點(diǎn)以及ADC 藥物結(jié)合位點(diǎn)鑒定，我們推薦THERMO 高分辨質(zhì)譜來(lái)做分析，Q-Exactive 串聯(lián)質(zhì)譜儀結(jié)合了高選擇性的四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器和高分辨、高靈敏度的 OrbitrapTM 質(zhì)量分析器，大大提高了離子的選擇性、靈敏度和質(zhì)量精度。該系統(tǒng)具有 140,000 的分辨率（FWHM）、更高的靈敏度、更快的掃描速度和更大的動(dòng)態(tài)范圍，同時(shí)結(jié)合了 HCD 碎裂技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)串級(jí)質(zhì)譜碎裂和鑒定，為深度復(fù)雜樣品分析，包括蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、脂類組學(xué)等樣品的鑒定，翻譯后修飾和定量分析，提供了全面、高效和快速的質(zhì)譜分析平臺(tái)。

ADC相關(guān)成分的定量分析

一般需要采用基于分離的技術(shù)表征ADC的單體含量、游離和能力,例如:尺寸排阻色譜法(SEC)、反相色譜法(RPC)、疏水相互作用色譜(Hydrophobic interactionchromatography, HIC)等。此外,質(zhì)譜( Mass Spectroscopy , MS )可用于識(shí)別細(xì)微的分子結(jié)構(gòu)變化; SEC可用于對(duì)揮發(fā)性流動(dòng)相中的ADC進(jìn)行脫鹽;在穩(wěn)定性期間還可采用SEC檢測(cè)ADC片段.

運(yùn)用電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)技術(shù)可識(shí)別基于半胱氨酸偶聯(lián)技術(shù)的ADC的分布,其在于可準(zhǔn)確地觀察分子離子或準(zhǔn)分子子;通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用(LCMS)與RPC相結(jié)合的方法可確認(rèn)偶聯(lián)類型和DAR。通常, LCMS技術(shù)用于Fc結(jié)構(gòu)域中含有保守N-低聚糖的還原或非還原性ADC的分析,以減少異質(zhì)性。

RPC和HIC為基于分子疏水性的分離方法中, RPC用于確定負(fù)荷、分布和異質(zhì)性,量化分析ADC混合物中的游離、ADC在不同儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性以及表征通過(guò)重鏈或輕鏈附著到Linker.上的mAb。與RPC類似, HIC是另一種用于表征ADC疏水性的分析技術(shù),DAR較的ADC表現(xiàn)出疏水性,可通過(guò)HIC進(jìn)行表征。

此外,親水性相互作用色譜是-種比反相液相色譜的亞單位水平結(jié)合物表征技術(shù),運(yùn)用LC-MS與HILIC相結(jié)合的方法可表征ADC的Payload和聚糖修飾;肽圖分析法(Peptide mapping)是研究特定ADC荷分布的另一種工具,多用于研究蛋白質(zhì)分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)和確定蛋白質(zhì)分子內(nèi)表面暴露的表位.

法通于去除Fc結(jié)構(gòu)域中的保守N-低聚糖;生物分析測(cè)定法用于評(píng)估釋放的游離、抗體總量和DAR; ELISA是定量與mAbs相偶聯(lián)的Payload的方法; MS用于測(cè)定游離的濃度;基于特定配體的分析方法用于了解ADC的特異性結(jié)構(gòu),可作為早期篩選技術(shù);電化學(xué)發(fā)光技術(shù)已用于表征完整ADC分子的結(jié)合能力。