牛奶中抗生素的快速檢測
本文主要對(duì)大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯(lián)膠體金快速檢測試紙條的檢測限、特異性、重復(fù)性、假陽性率、假陰性率以及影響膠體金檢測效果的主要因素等方面進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
?
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯(lián)膠體金快速檢測試紙條，是以膠體金技術(shù)和免疫層析技術(shù)相結(jié)合，可一次檢測4 種抗生素的快速檢測產(chǎn)品。廣泛地應(yīng)用于牛奶中抗生素的篩查，不需要儀器和設(shè)備，在10min 內(nèi)就能檢測出結(jié)果。本文主要研究使用快速試紙條對(duì)牛奶中的抗生素進(jìn)行快速檢測。
?
實(shí)驗(yàn)部分
實(shí)驗(yàn)材料
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯(lián)膠體金快速檢測試紙條(勤邦生物技術(shù)公司)：牛奶購自超市;大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素及其他抗生素標(biāo)準(zhǔn)品(sigma)。
檢測方法與結(jié)果判斷
吸取200 μl 待檢牛奶樣品于凍存有膠體金標(biāo)記抗體的微孔中，緩慢抽吸至與微孔中試劑充分混勻。將試紙條插入印有“MAX”線端朝下，使之完全浸入溶液中。20~25℃孵育5 min 后，取出試紙條觀察顏色，判定結(jié)果。
陰性(-)：C 線顯色，T 線均顯色，無論顏色深淺，均表示牛奶樣本中大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素濃度均低于檢測限。陽性(+)：C 線顯色時(shí)，T1 線不顯色，表示大觀霉素濃度大于等于檢測限;T2 線不顯色，表示鏈霉素濃慶大霉素濃度大于等于檢測限;T4 線不顯色，表示新霉素濃度等于或高于檢測限;未出現(xiàn)C 線，表明試紙條已失效。
圖1. 試紙條結(jié)果判定。
最低檢測限試驗(yàn)
將不同濃度的大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品添加的牛奶樣品分為5 組，每組樣品10 份， 大觀霉素、慶大霉素濃度分別為5、10、15、20、25 μg/L ;新霉素各組濃度分別為200、300、400、500、600 μg/L ;鏈霉素各組濃度分別為20、40、60、80、100 μg/L，分別用試紙條檢測，5 min 后觀察結(jié)果。
特異性試驗(yàn)
將牛奶中常見的其他抗生素(青霉素G、頭孢洛寧、四環(huán)素等)添加到陰性牛奶樣品中，使其終濃度為500 μg/L，用試紙條重復(fù)檢測5 次，5 min 后觀察結(jié)果。
重復(fù)性試驗(yàn)
分別取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)品的陽性牛奶和陰性牛奶各1 份，分別用試紙條進(jìn)行重復(fù)檢測20次，5 min 后觀察結(jié)果。
不同溫、濕度檢測
分別取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)品的陽性牛奶和陰牛奶各5份，分別在室溫(25℃)、培養(yǎng)箱(37℃)和冰箱(4℃)，在氣候箱中相對(duì)濕度為30~40%， 60~70%，85~90% 時(shí)用試紙條進(jìn)行檢測， 5 min 后觀察結(jié)果。
假陽性、陰性率
隨機(jī)取陰性牛奶樣品50 份， 用試紙條檢測，5 min 后觀察結(jié)果，以考察試紙條的假陽性率;隨機(jī)取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)品的陽性牛奶樣品50 份，用試紙條檢測，5 min后觀察結(jié)果，以考查試紙條的假陰性率。
?
檢測結(jié)果與分析
試紙條最低檢測限
牛奶中大觀霉素含量、慶大霉素含量<15 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陰性結(jié)果，大于等于20 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陽性結(jié)果，15 μg/L 時(shí)，檢測10 份樣品中有1 份出現(xiàn)陽性結(jié)果，抑制率為10% ;新霉素含量≤ 400 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陰性結(jié)果，大于等于500 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陽性結(jié)果;鏈霉素含量≤ 60 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陰性結(jié)果≥ 80 μg/L 時(shí)，均出現(xiàn)陽性結(jié)果。在本試驗(yàn)條件下試紙條的最低檢測限規(guī)定為：大觀霉素20 μg/L、慶大霉素20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L。
表1. 不同濃度抗生素牛奶檢測結(jié)果
?
表2. 試紙條重復(fù)性檢測
?
表3. 溫度的影響試驗(yàn)
?
表4. 濕度的影響試驗(yàn)
?
特異性試驗(yàn)
分別對(duì)添加500 μg/L 青霉素G、頭孢洛寧、四環(huán)素、紅霉素、林可霉素、氯霉素、磺胺二甲基嘧啶的牛奶樣品檢測時(shí)，檢測線和質(zhì)控線均顯色，結(jié)果為陰性，所以試紙條特異性較好。
重復(fù)性試驗(yàn)
表2 結(jié)果顯示，所檢樣品中，只有1 份樣品進(jìn)行慶大霉素檢測時(shí)出現(xiàn)陽性結(jié)果，總體陰性牛奶與陽性牛奶重復(fù)檢測結(jié)果均一，表明該試紙條重現(xiàn)性較好。
溫、濕度的影響
表3、4 結(jié)果表明，在25℃或相對(duì)濕度60~70% 進(jìn)行檢測，未出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果;在37℃、4℃或相對(duì)濕度30~40% 和85~90% 時(shí)，出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果， 相對(duì)濕度85~90% 時(shí)，影響顯著。
假陽性、陰性率試驗(yàn)
檢測50 份陰性牛奶，結(jié)果有48 份呈陰性，2 份呈陽性，即假陽性率為4%;檢測50 份陽性牛奶， 結(jié)果均呈陽性。
?
小結(jié)
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯(lián)膠體金快速檢測試紙條大大地提高了檢測效率，十分適合現(xiàn)場快速檢測。盡管此法目前只能達(dá)到半定量，但作為一種快速篩查的手段可以有效地彌補(bǔ)基層單位因設(shè)備和經(jīng)費(fèi)問題而導(dǎo)致的檢測方法的缺陷。
-
科技前沿
-
焦點(diǎn)事件
-
焦點(diǎn)事件
